Алат быстрый антиген: базовые знания о обнаружении нуклеиновой кислоты - часть 1

Алат быстрый антиген: Базовые знания о обнаружении нуклеиновой кислоты

1. Что такое обнаружение нуклеиновой кислоты

Определение нуклеиновой кислоты: нуклеиновая кислота представляет собой своего рода биологических макромолекул, соединенных нуклеотидами или дезоксинуклеотидами через 3 ', 5' - фосфатная рассеянная связь.

Нуклеиновая кислота имеет очень важные биологические функции, в основном хранения и передачу генетической информации.

2. Классификация нуклеиновых кислот

Макромолекулы нуклеиновой кислоты могут быть разделены на две категории: дезоксирибонуклеевая кислота (ДНК) и рибонуклеиновая кислота (РНК).

3. Состав нуклеиновой кислоты

ДНК и РНК образованы путем соединения головки и хвоста нуклеотида, который состоит из пяти элементов: C, H, O, N и P.DNA - генетический материал большинства организмов. РНК - генетический материал нескольких свободных вирусов ДНК, таких как ВИЧ, грипп, вирус SARS и т. Д. Средняя продолжительность РНК составляет около 2000 нуклеотидов, в то время как ДНК человека очень длинная, около 3x10 ^ 9 нуклеотидов.

4. Функция нуклеиновой кислоты

Он играет роль в хранении и передаче генетической информации в репликации белка и синтеза. Нуклеиновая кислота является не только основным генетическим материалом, но также играет важную роль в биосинтезе белка. Поэтому он играет решающую роль в серии важных жизненных явлений, таких как рост, наследственность и вариация.

ДНК и РНК являются нуклеиновыми кислотами. Каковы различия в их химическом составе следующим образом:

5. Тестовый метод

Метод обнаружения нуклеиновой кислоты в основном обнаруживает целевую нуклеиновую кислоту в образце при одновременном усилении целевой нуклеиновой кислоты и генерируя обнаруживаемый сигнал. Это может применяться к обнаружению нуклеиновой кислоты в клинической микробиологии, скрининге кровью, диагностики генетических заболеваний и профилактику, судебно-медицинской среды другие поля.

В настоящее время основные используемые методы следующие:

. Конкуренция нуклеиновой кислоты.

NASBA - это новая техника для изотермического усиления РНК, опосредованной парой праймеров, которая является непрерывной и равномерной и специфической нуклеотидной последовательностью in vitro. Реакцию проводили при 42 ℃, а шаблон РНК может быть усилен около 109 раз в 2 Часы. Принцип NASBA состоит в том, чтобы извлечь вирусную РНК, добавить AMV обратной транскриптазы, Rnase h, T7RNA полимеразы и праймеры для усиления. Вся реакция делится на нециклическую фазу и циклическую фазу: в нециклической фазе, грунтовку I и шаблон. РНК отожжена, чтобы синтезировать кДНК под действием AMV обратной транскриптазы с образованием РНК: ДНК гибрид, затем Rnaseh ухудшает РНК, грунтовку II и кДНК отжигают, чтобы синтезировать вторую дополнительную прямующую среду под действием обратной транскриптазы. Полимераза, двойная третьевая ДНК может быть запущена с помощью последовательности промотора для транскрибирования РНК. РНК может быть перевернута в ДНК под действием обратной транскриптазы, введите циркуляционную фазу и усиливаю большое количество шаблонов.

б. Оснужденное усиление транскрипции

Технический принцип TMA в основном такой же, как и у NASBA. Небольшое отличие состоит в том, что TMA использует MMLV обратная транскриптаза и полимераза T7RNA. Обратная транскриптаза MMLV имеет как активность обратной транскриптазы, так и активность Rnase H. Реакция проводилась при 41,5 ℃, а шаблон РНК мог быть усилен около 109 раз в течение 1 часа.

с. Лигазовая катализированная цепная реакция (LCR)

LCR - это технология амплификации зонда, основанная на взаимосвязи целевой молекулы зависимой олигонуклеотидными зондами. Это перспективная технология амплификации in vitro, разработанная после того, как принцип PCR.ITS - это принцип PCR.Its - это гибридизовать два сегмента олигонуклеотидного одноцепочечного датчика ДНК с целевой последовательностью. Когда два сегмента DNA зонд исчезают с шаблоном без мутации, если два зонда смеются, и в середине нет нуклеотидного интервала, они могут быть подключены под действием лигазы, а новая цепочка после соединения может быть использована в качестве соединения. Шаблон, чтобы направлять соединение в следующем цикле для получения новых дополнительных цепей. Если основной мутации нуклеотида происходит в соединительной части, соединяющая реакция не может возникнуть, а реакция усиления прекращается.

др. Анализ реакции цепной полимеразы (ПЦР)

Основной принцип технологии ПЦР аналогичен процессу естественного репликации ДНК, а его специфичность зависит от олигонуклеотидных грунтовки, комплементарных для обоих концов целевой последовательности.PCR состоит из трех основных этапов реакции: расширение отжига денатурации.

① Денатурация шаблона ДНК: после того, как ДНК шаблона нагревается до примерно 93 ℃ в течение определенного времени, двойная цепь шаблона ДНК или двойной пряди, образованной усилением ПЦР, диссоциируется, чтобы сформировать одну нить, так что его можно комбинировать с праймерами для подготовки к следующему раунду реакции.

② отжиг (перезапись) шаблона ДНК и грунтовки: после того, как ДНК шаблона нагревается и денатурирован в одну цепь, температуру падает до примерно 55 ℃, а грунтовка сочетается с дополнительной последовательностью одной цепи шаблона ДНК.

③ Расширение грунтовки: под действием Taqdna Polymerase Primplate Primplate DNA использует DNTP в качестве реакционного сырья и целевой последовательности в качестве шаблона для синтеза новой полу сохраненной цепочки репликации в цепочке ДНК-шаблона в соответствии с принципом базового сопряжения и полу сохраненных репликация. Повторите три процессы расширения циклического денатурации, чтобы получить больше \"полу сохраненных цепей репликации \", и эта новая цепочка может стать шаблоном для следующего цикла. Это занимает 2-4 минуты и 2-3 часа для усиления целевого гена Быть расширенным миллионами времен. Чтобы обнаружить РНК ВИЧ, нам необходимо транскрибировать РНК в кДНК путем обратной реакции транскрипции, а затем усиление ПЦР с кДНК в качестве шаблона. Эта реакция называется RT-PCR.